課題番号 ： S-19-NM-0084
利用形態 ： 技術代行
利用課題名（日本語） ： ヒト前立腺癌細胞株のmiRNAマイクロアレイ解析
Program Title (English) ： miRNA microarray analysis of human prostate cell lines
利用者名（日本語） ： 渡邉昌俊1)
Username (English) ： M. Watanabe1)
所属名（日本語） ： 1) 三重大学大学院医学系研究科
Affiliation (English) ： 1) Faculty of Medicine, Mie University Graduate School

１．概要（Summary）
前立腺がんは国内においては年間10万人あたり118人程度で、男性では胃がん、大腸がん、肺がんに次いで罹患率が高いがんである。予後が比較的良い疾患ではあるものの、前立腺がんの発生・進展のメカニズムは十分に解明されていない。当研究室では近年、前立腺癌細胞株の培養において特定の条件培地を与えた際の顕著な挙動を見出した。本研究では条件培地で培養した前立腺癌細胞株の遺伝子発現変化、特にmiRNAの発現変化に着目しそのメカニズムの解明に役立てることを目的とする。そこで、網羅的にmiRNAの発現を調べることができるマイクロアレイ解析についてNIMS分子・物質合成プラットフォームに技術代行を依頼した。

２．実験（Experimental）
【利用した主な装置】
 マイクロアレイスキャナー

【実験方法】
培養細胞：前立腺癌細胞株PC3細胞及びDU145細胞について特定の細胞由来の条件培地で培養。
実験条件：PC3細胞及びDU145細胞それぞれについて条件培地の有無で24時間後と48時間後の計8条件。
マイクロアレイ：Agilent G4870C SurePrint G3 Human v21 miRNA 8x60K Microarray Kit。
ハイブリダイゼーション：一色法。
マイクロアレイスキャナー：Agilent G2600D SureScan Microarray Scanner。
数値化ソフトウェア：Agilent Feature Extraction v11.5。

３．結果と考察（Results and Discussion）
マイクロアレイ解析のスキャン画像(Fig. 1)は良好であり、ハイブリダイゼーションは正常に行われた。
画像から数値化して階層的クラスタリング分析を行なったところ、PC3細胞とDU145細胞の違い、条件培地の有無、培養時間(24時間後または48時間後)の違い、それぞれのmiRNA発現に対する影響の大きさが比較できた。
一色法で行なったため、発現量の比を8通りの方法で求めてみた(Table 1)。その結果、発現量が2倍以上または1/2以下に変動するmiRNAが65個見出された。

４．その他・特記事項（Others）
技術支援者：竹村太郎、森田浩美、高橋みどり
技術代行内容：培養細胞抽出RNAからのmiRNAマイクロアレイ解析。

５．論文・学会発表（Publication/Presentation）
なし

６．関連特許（Patent）
なし