課題番号 ：S-19-NM-0022
利用形態 ：技術補助
利用課題名（日本語） ：合成ポリマーの添加によるタンパク質の安定化メカニズム解明
Program Title (English) ：Study on Protein Stabilization Mechanism of Synthetic Polymers addition
利用者名（日本語） ：徐　盈佳
Username (English) ：Yingjia Xu
所属名（日本語） ：JSR株式会社　筑波研究所
Affiliation (English) ：JSR Corporation, Tsukuba Research Laboratories

１．概要（Summary ）
合成ポリマーBlockmasterTM DB1130およびPA1080が免疫診断分野に使われている抗原（ペプシノーゲン（I）（II）, 前立腺特異抗原）の安定化に有効であることを確認できた。タンパク質安定化メカニズムについて，下記の2つの仮説を立てた。仮説1：BlockmasterTMがタンパク質の容器への吸着を抑制する。仮説2：BlockmasterTMが溶液中のタンパク質表面との相互作用により，その高次構造を維持させる。仮説2を検証するため、表面プラズモン共鳴（SPR）装置を用いてBlockmasterTMのタンパク質との相互作用を評価した。

２．実験（Experimental）
表面プラズモン共鳴（SPR）装置(GEヘルスケア ライフサイエンス，BiacoreX100)を利用した。CM5センサーチップにはPSA（前立腺特異抗原）をアミンカップリング法で固定化した（Target level:1000RU）。異なる濃度（0.1 wt%~4 wt%）のDB1130とPA1080のPBS（-）溶液を流動相とし，各溶液をPSAが固定化されたチップとリファレンスチップに流した。DB1130とPA1080のPBS（-）溶液を流す前後のシグナル（RelResp.）変化を測定した（リファレンスシグナルを引いた値を使用した）。

３．結果と考察（Results and Discussion）
PSAが固定化されたセンサーチップにBlockmasterTMのPBS（-）溶液を流す前後でのシグナル（RelResp.）変化が検出されたことから，ポリマーとタンパク質との相互作用が明らかとなった。また，図（a）ではポリマー濃度の増加によりシグナル変化の上昇を確認した。更に，PSA－抗PSA抗体のような抗原－抗体の相互作用と比較すると，図（b）からわかるようにポリマーとPSAの相互作用は非常に弱かった。PSA－抗PSA抗体の結合は強固で非可逆的であり，PBS（-）による洗浄でチップを再生できなかったのに対し，BlockmasterTMとPSAとの吸着はPBS（-）での洗浄により脱離しチップを再生できたことから，バッファー中ポリマーとPSAは吸着－脱離の平衡状態であると推測される。

４．その他・特記事項（Others）
機器の利用にあたり李香蘭博士の支援を受けた。

５．論文・学会発表（Publication/Presentation）
(1)徐　盈佳, 新井　隆之, 宮路　正昭, JSR TECHNICAL REVIEW,No.127（2020）p.p.23-31.

６．関連特許（Patent）
なし