課題番号 ：S-17-NM-0065
利用形態 ：機器利用
利用課題名（日本語） ：小麦タンパクの解析
Program Title (English) ：Analysis of wheat proteins
利用者名（日本語） ：木澤恵子
Username (English) ：
所属名（日本語） ：日清製粉株式会社
Affiliation (English) ：NISSHIN FLOUR MILLING INC.

１．概要（Summary ）
小麦粉抽出液中に含まれるタンパク質をLC-MS/MSで同定するため、適したサンプルの処理方法等を検討した。

２．実験（Experimental）
小麦粉抽出液又は電気泳動ゲルをトリプシン消化し、LC-MS/MSで解析を行った。

３．結果と考察（Results and Discussion）
（１）サンプル前処理法の検討
以下のサンプルをトリプシン消化し、LC-MS/MSで解析した。
①小麦粉抽出液を二次元電気泳動し、スポットを切り出したサンプル
②小麦粉抽出液のSDS-PAGEからスメア部分を切り出したサンプル
③小麦粉抽出液のSDS-PAGEからバンドを切り出したサンプル
④小麦粉抽出液をアセトンでタンパク質のみ沈殿させ、8MUreaに溶解したサンプル
LC-MS/MS解析結果は、④のサンプルが最もCoverageが高かったため、④の方法でトリプシン消化を行うこととした。

（２）データベースの変更
LC-MS/MS解析に用いるデータベースにNCBI Swiss-Protを用いると、目的のタンパク質の中で同定される数が少なかったため、自分でデータを収集し、データベースを変更することで目的の同定が行えるようになった。

（３）GEL-FREE8000での分画
目的タンパク質をより精度よく同定するために、GEL-FREE8000を用いて、サンプルを5個に分画した。今後LC-MS/MS解析を行う。

４．その他・特記事項（Others）
NIMS竹村様、服部様、李香蘭様に支援を受けました。

５．論文・学会発表（Publication/Presentation）
なし