課題番号 ：S-15-KU-0016
利用形態 ：機器利用
利用課題名（日本語） ：核酸―酵素コンジュゲートの分子構造解析
Program Title (English) ：Structural analysis of DNA-enzyme conjugate
利用者名（日本語） ：高原　茉莉, 神谷　典穂
Username (English) ：M. Takahara, N. Kamiya
所属名（日本語） ：九州大学未来化学創造センター
Affiliation (English) ：Center for Future Chemistry, Kyushu University

１．概要（Summary）
本研究では、２種類の酵素反応を組み合わせることで得られる新規核酸-酵素コンジュゲートの機能解析を行っている。特にコンジュゲートを構成する核酸と酵素の組成比、核酸部位のヌクレオシド構成比の詳細分析が、得られるデータの解釈と構造-機能相関に必須である。そこで、ナノテクPFの支援の下、昨年に引き続きコンジュゲートにおけるDNA一本鎖あたりの酵素数の定量分析を行うことで、更なる研究の展開を図る。
２．実験（Experimental）
新規核酸-酵素コンジュゲートの構造解析を目的とし、まずはコンジュゲートを加水分解酵素で分解し、ヌクレオチド単位まで分解した。その後、各種ヌクレオチを含むサンプルをLC-micrOTOFにアプライし、各ヌクレオチドの分離と定性、定量を同時に行い、コンジュゲートに導入されたヌクレオチド及び酵素の定量解析を実施した。
３．結果と考察（Results and Discussion）
LC-micrOTOFから得られた定性・定量解析から、２種類の酵素反応を組み合わせて得たコンジュゲートは、修飾ヌクレオチドとチミンの組み合わせで高効率に酵素が標識された核酸-酵素コンジュゲートが得られることが示唆された。
４．その他・特記事項（Others）
参考文献
M.Takahara, K. Hayashi, M.Goto, N. Kamiya, Tailing DNA aptamers with a functional protein by two-step enzymatic reaction, J. Biosci. Bioeng., 116, 660–665 (2013).
５．論文・学会発表（Publication/Presentation）
・論文
M. Takahara, H. Hayashi, M. Goto, N. Kamiya, “Enzymatic conjugation of multiple proteins on a DNA aptamer in a tail-specific manner”, Biotechnol. J., Accepted (2016).
・学会発表
「酵素-DNA アプタマー複合体の高効率調製を志向した酵素反応系の構築」高原茉莉、林浩之輔、後藤雅宏、神谷典穂、日本化学会第95春季年会　平成27年3月27日、日本大学理工学部 船橋キャンパス／薬学部
(日本化学会第95春季年会 学生講演賞受賞)
６．関連特許（Patent）
なし