課題番号 ：S-18-NM-0035
利用形態 ：機器利用
利用課題名（日本語） ：発がん及び組織再生時の形態形成に関与する遺伝子・蛋白質の同定とその機能解析Program Title (English) :Identification and functional analyses of genes and proteins involved in carcinogenesis and morphogenesis in tissue regeneration.
利用者名（日本語） ：野口雅之1), 加野准子1), Zeinab Kosibaty2) , 臺知子2)
Username (English) ：M. Noguchi1), J. Kano1), Z. Kosibaty2), T. Dai2
)所属名（日本語） ：1) 筑波大学医学医療系診断病理, 2) 筑波大学大学院人間総合科学研究科
Affiliation (English) ：1) Medical Sciences、Tsukuba University, 2) Graduate School of Comprehensive Human Sciences、Tsukuba University
１．概要（Summary）
発がんや組織の再生時には特徴的な形態形成が見られるが、顕微鏡による診断には診断者間の不一致が見られる。特徴的形態形成に関与する遺伝子・蛋白質が同定されればISH、FISH、特異抗体を用いた免疫組織診断などを行うことで、正確な診断の補助や早期発見のマーカーとなる可能性がある。またこれらの遺伝子・蛋白質の機能を解析することによって分子標的治療への応用に繋がることが期待される。

２．実験（Experimental）
【利用した主な装置】
LC/MS/MS (Q-Exactive)
【実験方法】
本年度は昨年度までの相互作用（結合）タンパクの解析を継続して行った。すなわちこれまでの研究結果に基づき肺腺癌において特徴的形態形成に関与するとして検出された標的分泌タンパクDKK3について、その機能を検証するためにLC/MS/MSを用いて相互作用タンパクの検出を試みた。具体的には肺腺癌細胞株の対象蛋白強制発現系を作成し、プルダウンアッセイもしくは免疫沈降アッセイのサンプルを得た。さらにそれらサンプルを用いたSDS-PAGEを行い、銀染色検出後、切り出したゲルバンドをトリプシン消化し、LC/MS/MSにて解析を行い結合タンパクの同定を行った。

３．結果と考察（Results and Discussion）
今回対象とした分泌タンパクDKK3はこれまでの研究から肺腺癌の悪性化に作用することが示唆されていた（第107回日本病理学会、小森ら）。このタンパク分子について、平成30年度1回の解析を含め計3回のLC/MS/MS解析を行った結果、候補結合タンパクを同定できた（Table 1）。その中からスキャンシグナルインテンシティー、ユニークペプチド数、検出ペプチド数などを基準に優先順位を決定した。選択した候補タンパクについて結合をウェスタンブロッティングによって確認を進めている。

４．その他・特記事項（Others）
装置利用・データ解析についてNIMS服部晋也氏、竹村太郎氏の支援を受けた。

５．論文・学会発表（Publication/Presentation）
なし

６．関連特許（Patent）
なし