課題番号                ：S-18-NM-0008

利用形態                ：機器利用

利用課題名（日本語）    ：ハーブ・スパイス成分の生合成に関する研究

Program Title (English) ：Research for constituent of herbs and spices

利用者名（日本語）      ：喜多　智子

Username (English)     ：Tomoko Kita

所属名（日本語）        ：ハウス食品グループ本社（株）

Affiliation (English)  ：House Foods Group Inc.

• 概要（Summary ）

ハーブ、スパイスの成分（二次代謝産物）の生合成について研究を行なうため、レーザーマイクロダイセクション装置で、二次代謝産物を蓄積している細胞を切り出して、部位ごとのRNA-seq解析を試みた。

２．実験（Experimental）

【利用した主な装置】

レーザーマイクロダイセクション装置

サーマルサイクラ―

【実験方法】

レーザーマイクロダイセクション装置（ライカマイクロシステムズ：LMD7000）で、ハーブ・スパイスの切片から二次代謝産物を蓄積する細胞を切出した。切り出した細胞からRNAを抽出・精製し、逆転写反応によるcDNA作成、PCR反応によるcDNA増幅を行なった上で、次世代シーケンサーによるRNA-seq解析委託を行なった。

３．結果と考察（Results and Discussion）

レーザーマイクロダイセクション装置で切り出した細胞からRNAを抽出・生成し、逆転写反応によるcDNA作成、PCR反応によるcDNA増幅を行なった結果のcDNAサンプルを電気泳動し、品質をチェックしたところ、400bp付近から2kbp超まで、さまざまな長さのcDNAが含まれており、RNA抽出からcDNA増幅までの操作が、滞りなく進んだことがわかった（図）。

RNA-seqが可能な品質のcDNAであることがわかったので、委託解析を行なった。その結果、二次代謝成分の生合成に関わる酵素の遺伝子と、それに関連すると思われる転写因子の遺伝子が複数見つかった。

委託解析結果のデータが膨大であるため、データ解析が終わっていない。来期は、本解析結果と、別途行なっているプロテオーム解析の結果を組合せて、新たな知見を得たいと考えている。

４．その他・特記事項（Others）

NIMS分子・物質合成プラットフォーム李香蘭博士にLMD使用について支援を受けた。

５．論文・学会発表（Publication/Presentation）

なし

６．関連特許（Patent）

なし