課題番号 ：S-17-NM-0092
利用形態 ：機器利用
利用課題名（日本語） ：眼内に浸潤する炎症細胞・腫瘍細胞のラマン散乱光解析による鑑別
Program Title (English) ：Discrimination between intraocular inflammatory cells and tumor cells using Raman Spectroscopy
利用者名（日本語） ：岩﨑優子1), 川岸将彦2)
Username (English) ：Y. Iwasaki1), M. Kawagishi2)
所属名（日本語） ：1) 東京医科歯科大学眼科, 2) 東京医科歯科大神経機能形態学講座
Affiliation (English) ：1) Department of Ophthalmology, Tokyo Medical and Dental University, 2) Section of Neuroanatomy and Cellular Neurobiology, Department of Systems Neuroscience, Tokyo Medical and Dental University

１．概要（Summary ）
眼内に炎症細胞や腫瘍細胞が浸潤すると、眼内が混濁し視力低下をきたす。本研究の目的は、眼内への浸潤が報告されている種々の細胞種（Tリンパ球、Bリンパ球、好中球、単球やリンパ腫細胞）の鑑別にラマン散乱光解析が有用であるかを検討し、将来ヒト眼内の硝子体混濁成分をin vivoにて非侵襲的に解析することの有用性を評価することである。2017年度は、リンパ腫セルラインを用いて、ラマン散乱光測定の条件検討を行った。

２．実験（Experimental）
リンパ腫セルラインKBL-1を東京医科歯科大学で培養。10%中性緩衝ホルマリンで処理した固定細胞を持参した。観察に使用したのは高速レーザーraman顕微鏡「RAMANplus」である。
ガラスボトムディッシュに細胞懸濁液を入れ、100倍の水浸対物レンズで観察した。細胞の撮影方法を決めるために、まず、細胞の核の位置で、細胞を含むようにpoint-Z撮影を行った。次に、光学顕微鏡にて明瞭な像が得られるZ位置にて、核、細胞質、近傍のPBSの撮影を行った。

３．結果と考察（Results and Discussion）
①核におけるpoint-Z撮影では、以下のような43のスペクトラムを得た。

ここから、主成分分析をすることで、43のスペクトラムが三つのグループにわけられ、point-Zで撮影した複数のデータから細胞由来の波形を選択できることを確認した。
②核、細胞質、近傍のPBSから得たデータを同様に主成分分析したが、核と細胞質のデータは明瞭な違いが無かった。無染色での光学顕微鏡観察にて、核と細胞質を正確に見極められていない可能性が考えられた。
以上の結果より、今後の細胞の撮影においては、１）細胞内の構造によらず、ランダムに3か所の撮影を行い一つの細胞のデータとすること、２）１か所の撮影では、point-Z撮影を行い主成分分析をすることで細胞由来のデータを選択すること、の二つのルールに従うことが決まった。

４．その他・特記事項（Others）
NIMS　竹村様、服部様に支援を受けた。

５．論文・学会発表（Publication/Presentation）
なし。

６．関連特許（Patent）
なし。