課題番号（Application Number）：S-15-NR-0044
利用形態（Type of Service）：共同研究
利用課題名（日本語） ：小麦グリアジンタンパク質との抗原抗体反応を阻害する食品因子の解析
Program Title (English) ：Characterization of inhibitors of the reaction between gliadin and its antibodies from foods.
利用者名（日本語） ：村上太郎
Username (English) ：T. Murakami
所属名（日本語） ：大阪市立環境科学研究所
Affiliation (English) ：Osaka City Institute of Public Health and Environmental Sciences

１．概要（Summary ）
アレルギーを引き起こす可能性のあるタンパク質の検査ではELISA（Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay）法による測定法がスクリーニング検査として利用されている。検査対象となる加工食品の原材料は多種多様であり、測定に際してはカラムなどによる精製は行われないため、検査が行われる試料抽出液には多くの食品由来の夾雑物が含まれる。これまでの研究でELISA法による測定に影響を及ぼす原材料の探索を行い、小麦グリアジンの測定がポリフェノール重合体のプロアントシアニジンによって阻害を受けていることを確認した。しかしながら、原材料中のプロアントシアニジンの構造は多種多様であり、その阻害機序については明らかでない。このため、本研究ではマトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型質量分析計（MALDI-TOFMS）によって、プロアントシアニジンと小麦グリアジンの複合体の検出について検討を行った。
２．実験（Experimental）
本研究では奈良先端科学技術大学院大学のMALDI-TOFMS（Bruker製 Autoflex II）によって測定を行った。 ELISA法による小麦グリアジンの測定ではSDSなどの界面活性剤を含む水溶液によって抽出を行う。しかしながら、測定溶液中のSDS はMALDI-TOFMSによる測定時にイオンサプレッションを引き起こす可能性があるため、SDS共存濃度の測定への影響を確認した。また、高濃度SDS共存条件でのMALDI-TOFMSによるタンパク質の解析手法が報告されていたため[1]、同方法が小麦グリアジンの検出に応用できるか検討を行った。測定条件の検討後、小麦グリアジン溶液にプロアントシアニジンを含む食品（ブドウ種子抽出物）の抽出液を一定量加え、Sinapic Acidと混合後にMALDI-TOFMSによって測定を行った。
３．結果と考察（Results and Discussion）
測定溶液中のSDS共存濃度の評価の結果、SDS濃度が0.25％（w/v）以下の時に、小麦グリアジン由来のマススペクトルが検出された。SDS濃度0.5％（w/v）の測定溶液を種々の強イオン交換修飾された破砕状シリカゲルの存在下で測定を行ったが、小麦グリアジン由来のマススペクトルは検出されなかった。このため、ブドウ種子抽出物の共存濃度ごとの小麦グリアジン溶液のマススペクトルの確認はSDS濃度0.25％の条件で測定を行った。測定の結果、プロアントシアニジンの共存濃度の増加によって、小麦グリアジン由来のマススペクトルの減少が確認された。しかしながら、小麦グリアジンとプロアントシアニジンの複合体由来のマススペクトルは検出されなかった。
４．その他・特記事項（Others）
4.1参考文献
[1] Miwako Asanuma, Seketsu Fukuzawa, Takayoshi Matsuda, Hiroshi Hirota, Rapid Commun Mass Spectrom. 23, 1647–1653, 2009
4.2　謝辞
本研究はJSPS科研費（課題番号25860474）の助成を受けて実施しました。強イオン交換修飾された破砕状シリカゲルは理化学研究所ケミカルバイオロジー研究基盤施設　廣田洋様から提供して戴きました。本研究の実施にあたり、奈良先端科学技術大学院大学物質創成科学研究科　垣内喜代三教授に助言を戴きました。測定にあたり研究協力部研究協力課 西川嘉子様ならびに福田和夫様に協力して戴きました。
５．論文・学会発表（Publication/Presentation）
なし。
６．関連特許（Patent）
なし。