課題番号 ：S-19-NM-0051
利用形態 ：機器利用
利用課題名（日本語） ：糸状菌が多様な条件下で細胞外に放出するタンパク質の同定
Program Title (English) ：Identification of fungal extracellular proteins in various condition
利用者名（日本語） ：萩原大祐1), 浦山俊一1),高田万里奈 1)
Username (English) ：Daisuke Hagiwara1), Syunichi Urayama1), Marina Takata1)
所属名（日本語） ：1) 筑波大学
Affiliation (English) ：1) University of Tsukuba

１．概要（Summary）
糸状菌は酵素生産や発酵を担う重要な生物群であり、細胞外に放出されるタンパク質に関する研究が精力的に進められている。一方、これらの検討は特定の条件下で行われるに留まっており、新たな培養基質や環境条件下、他の微生物の存在等により新たなタンパク質が産生されることが予想される。そこで、本研究では様々な条件下で糸状菌を培養し、細胞外に放出されるタンパク質の網羅的同定を行う。

２．実験（Experimental）
【利用した主な装置】
 LC-MS(Q-Exactive)

【実験方法】
本研究では、特定の培地および培養条件下で糸状菌が産生したeMV (extracellalar membrane vesicle) に含まれるタンパク質を網羅的に同定するため、精製eMV由来総タンパク質と、比較対象として菌体由来総タンパク質を解析対象とした。トリプシン処理を行った試料を用い、LC-MS (Q-Exactive_P)を使用してPMF解析を行った。

３．結果と考察（Results and Discussion）
　Magnaporthe oryzaeを用いた解析では、eMVには膜局在型タンパク質群（膜貫通ドメインやGPIアンカードメイン、PHドメイン等を有する）が高度に農集していることが明らかになった（Table 1）。また、一部の分泌タンパク質も含まれていた。Aspergillus oryzaeについては追試を進めている。

Table 1. Proteomic analysis of M. oryzae eMV.

４．その他・特記事項（Others）
国立研究開発法人　物質・材料研究機構　分子・物質合成プラットフォームの服部晋也先生には技術講習等で迅速な対応をしていただきました。御礼申し上げます。

５．論文・学会発表（Publication/Presentation）
(1) Syun-ichi Urayama, Yuka Iwahashi et al., Characterization od extracellular membrane vesicle in liquid culture of Magnaporthe oryzae and Aspergillus oryzae, 15th European Conference on Fungal Genetics, 2020, 2, 17.
(2) 浦山俊一, 岩橋由佳, 桝尾俊介, 兼松周作, 森山裕充, 高谷直樹,野村暢彦, 竹下典男, 豊福雅典, 萩原大祐, イネいもち病菌における細胞外膜小胞の探索と性状解析, 令和元年度糸状菌分子生物学コンファレンス, 2019, 11, 6.
(3) 岩橋由佳，浦山俊一，桝尾俊介，兼松周作，高谷直樹，野村暢彦，竹下典男，豊福雅典，萩原大祐, Aspergillus属菌における細胞外膜小胞の探索, 令和元年度糸状菌分子生物学コンファレンス, 2019, 11, 6.

６．関連特許（Patent）
なし