課題番号                ：S-20-NM-0028

利用形態                ：

利用課題名（日本語）    ：食品成分解析

Program Title (English) ：

利用者名（日本語）      ：饒聖分, 小柳正徳

Username (English)     ：

所属名（日本語）        ：日本ハム（株）中央研究所

Affiliation (English)  ：

１．概要（Summary ）

これまで自社作製抗体のアフィニティー測定は、ELISA法、FACSでの表面抗原解析を使用して測定していましたが、分子間相互作用解析システム機器であるBia core X100 を使用することでより高精度のアフィニティー測定ができる可能性があると考えられました。そこで実際に従来法のデータと比較するため、今回の測定を実施しました。

２．実験（Experimental）

【利用した主な装置】

表面プラズモン（Bia core X100）

【実験方法】

アフィニティー、カイネティクス測定試験

Series S Sensor Chip CM5（＃29104988）チップにリガンド（Mouse Antibody Capture Kit（＃BR100838））を固相化しAmine Coupling Kit（#BR100050）で固定化及びブロッキング、アナライト（培養上清と食品アレルゲン）を添加する試験系で測定を実施しました。

（従来はSeries S Sensor Chip Protein G （＃29179315）を使用し、培養上清と食品アレルゲンを添加する試験系）

条件検討

・リガンドの固定

センサーチップにリガンド固定量、流速はキットの推奨値よりも若干流速を落とし固定化効率を上昇。

・抗体（培養上清）

培養上清の希釈濃度は、1度目の検討で原液を使用したが、ピークの波長に若干の乱れがあったので精製抗体に変更。

・アナライト（食品アレルゲン）

Bia coreで測定を行う場合、タンパク濃度は通常モル濃度で使用するため、アナライト（食品アレルゲン）の濃度が1mg/mLで分子量が3135であることからモル濃度が314Mと算出し、10mM/mLに調整。

・R max値（最大結合値）

R max値（最大結合値）を算出。リガンド固定化量が5000、抗体の分子量が150kDとアナライトの分子量が3.14kD、抗体の結合部位が2つであることからRmax値（最大結合値）が200RUと算出した。

＊Bia coreの実験ではセンサーチップに固定化する分子をリガンド、それに対して結合を測定する分子をアナライトと呼びます。

３．結果と考察（Results and Discussion）

アフィニティー測定及びカイネティクス測定を実施した結果、いくつか使用可能な抗体が見つかった。（Fig.1、2、3、4、5）

Fig.1

Fig.2

Fig.3

Fig.4

Fig.5

４．その他・特記事項（Others）

NIMS：箕輪貴司様、李香蘭様の指導の下、Bia core X100によるアフィニティー、カイネティクス測定試験のトレーニングを受けた。

５．論文・学会発表（Publication/Presentation）

なし

６．関連特許（Patent）

なし