課題番号                ：S-19-CT-0127

利用形態                ：機器利用

利用課題名（日本語）    ：OsO₄浸軟法を用いた家畜骨格筋の筋細胞内オルガネラの観察

Program Title (English) ：Observation of organelles in myocytes of livestock skeletal muscle using

OsO₄ maceration

利用者名（日本語）      ：長谷川靖洋, 岩崎智仁

Username (English)     ：Y．Hasegawa, T. Iwasaki

所属名（日本語）        ：酪農学園大学

Affiliation (English)  ：Rakuno Gakuen University.

１．概要（Summary ）

近年，ブロイラーでは様々な肉質異常を呈する個体が頻発している^1）．肉質の異常は，筋細胞（筋線維）のミトコンドリア異常に関係があることから，ニワトリ胸肉の筋細胞オルガネラの立体的超微細構造観察を行うことを目的として，その形態変化を捉えるための最適なO_SO₄浸軟条件の構築を目指した．

２．実験（Experimental）

肉質異常を呈したニワトリを屠殺して浅胸筋を採取し，各種濃度の固定液にて固定処理した．試料を1%OsO₄後固定処理後に50％DMSOに置換して液体窒素下で凍結割断した．割断後の試料を0.1%OsO₄溶液に4-12日間浸漬（20˚C）した後に，所定の手順にて走査型電子顕微鏡試料とした．オートファインコーターにて，白金をコートした後に，筋細胞内のオルガネラ構造（特にミトコンドリア）の電界放出形走査型電子顕微鏡（FE-SEM）による観察を試みた．

利用装置：

FE-SEM（JEOL JSM-7800F）

３．結果と考察（Results and Discussion）

　0.5％PFA,0.5%GA固定処理後に4日間の1%OsO₄浸軟処理したニワトリ浅胸筋の電子顕微鏡像を図1上段に，同条件のマウス長指伸筋の顕微鏡像を図1下段に示した．ニワトリでは，筋線維内の筋フィラメントの分解が進んでおらず，筋細胞内には細胞質が充填されている部分が多くミトコンドリアの観察は難しかった（図1上段）．マウスの場合は，筋線維内の筋フィラメントが分解されており，強拡大にてミトコンドリア構造の観察が可能であった（図1下段挿入図）．ニワトリ浅胸筋の浸軟処理を8日間に延長した試料についてFE-SEM観察を行った結果を図2に示した．浸軟処理を延長しても筋フィラメントは分解されていなかった．今後は固定方法やその他の条件について検討を進める予定である．

４．その他・特記事項（Others）

1）Y. Hasegawa, T. Hara, T. Kawasaki, M. Yamada, T. Watanabe, T. Iwasaki, Food Chemistry, DOI: https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2020.126285

本課題は令和元年度、公立千歳科学技術大学ナノテクノロジープラットフォーム事業試行的利用の採択を受け実施した。

５．論文・学会発表（Publication/Presentation）

なし

６．関連特許（Patent）

なし